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southern雜交指的是什么? 瓊脂糖凝膠電泳分離待測DNA樣品基本原理是什么?|天天熱訊

來源:今日熱點 時間:2023-06-25 13:45:34

southern雜交指的是什么?

Southern印跡雜交(Southern blot)是1975年由英國人southern創(chuàng)建,是研究DNA圖譜的基本技術(shù),在遺傳病診斷、DNA圖譜分析及PCR產(chǎn)物分析等方面有重要價值。由于核酸分子的高度特異及檢測方法的靈敏,綜合凝膠電泳和核酸內(nèi)切限制酶分析的結(jié)果,便可繪制出DNA分子的限制圖譜。但為了進一步構(gòu)建出DNA分子的遺傳圖,或進行目的基因序列的測定以滿足基因克隆的特殊要求,還必須掌握DNA分子中基因編碼區(qū)的大小和位置。有關(guān)這類數(shù)據(jù)資料可應(yīng)用Southern印跡雜交技術(shù)獲得。

瓊脂糖凝膠電泳分離待測DNA樣品基本原理是什么?

Southern印跡雜交是先將DNA樣品(含不同大小的DNA片段)先按片段長短進行分離,然后進行雜交。這樣可確定雜交靶分子的大小。因此,制備DNA樣品后需要進行電泳分離。在恒定電壓下,將DNA樣品放在0.8~1.0%瓊脂糖凝膠中進行電泳,標準的瓊脂糖凝膠電泳可分辨70-80000bp的DNA片段,故可對DNA片段進行分離。但需要用不同的膠濃度來分辨這個范圍內(nèi)的不同的DNA片段。原則是分辨大片段的DNA需要用濃度較低的膠,分辨小片段的DNA則需要濃度較高的膠。經(jīng)過一段時間電泳后,DNA按分子量大小在凝膠中形成許多條帶,大小相同的分子處于同一條帶位置。另外為了便于測定待測DNA分子量的大小或是所處的分子大小范圍,往往同時在樣品鄰的泳道中加入已知分子量的DNA樣品即標準分子量DNA (DNA marker)進行電泳。DNA marker可以用放射核素進行末端標記,通過這種方式,雜交后的標準分子量DNA也能顯影出條帶。

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標簽: southern雜交指的是什么瓊脂糖凝膠電泳

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